Mulyadi, A. N., Baldermann, S., Yang, Z., Murata, A., Fleischmann, P., Winterhalter, P., Knight, M., Finn, T. M., Watanabe, N.
Centrifugal precipitation chromatography and a high-speed counter-current chromatography system equipped with a spiral tubing support rotor (spHSCCC) were successfully applied for the identification and isolation of carotenoid cleavage-like enzymes from Enteromorpha compressa (L.) Nees. This is the first study separating active enzymes from a complex natural matrix by spHSCCC. The target enzymes were identified after fractionation of the proteins in an acetone Tris-buffer gradient by centrifugal precipitation chromatography. Also, an aqueous two-phase solvent system consisting of PEG 1000 and mono- and dibasic potassium phosphate was used for the isolation of the enzymes by spHSCCC. The purified fractions contained two proteins of 65 and 72kDa, respectively. The enzymes could cleave β-carotene and β-apo-8′-carotenal to produce β-ionone.
Sistem kromatografi sentrifugal presipitasi dan kromatografi kecepatan tinggi berlawanan arah yang dilengkapi dengan spiral tubing support rotot (spHSCCC) sukses diaplikasikan untuk pengidentifikasian dan pengisolasian karotenoid-seperti enzim dari Enteromorpha compressa (L.) Nees. Ini adalah studi pertama yang memisahkan enzim aktif dari matriks alami kompleks dengan spHSCCC. Target enzim diidentifikasi setelah fraksionasi protein dalam sebuah gradient Tris-buffer aseton dengan kromatografi sentrifugal presipitasi. Juga, sistem pelarut 2 fase encer yang terdiri dari PEG 1000 dan mono- dan dibasic potassium phosphate digunakan untuk isolasi enzim dengan spHSCCC. Fraksi murni mengandung 2 protein masing-masing dari 65 dan 72kDa. Enzim-enzim tersebut dapat memecah β-carotene dan β-apo-8′-carotenal untuk menghasilkan β-ionone.